[導(dǎo)讀]一次給進修生講課，我問：“你們會使用顯微鏡嗎?”，聽著認識好笑!曹老師問這么幼稚的問題!全場的舉手，一致回答“會”。我又問：“誰懂得合軸調(diào)節(jié)?”一時啞口無言。我再問“哪一位能夠說一說什么是齊焦精度?等高轉(zhuǎn)換?”也是沉默不語。我問：“有沒有看顯微鏡后頭腦發(fā)暈?模糊不清?”大家反應(yīng)活躍，這個說：“我曾經(jīng)有過!那個說就是不明白怎么回事?”議論紛紛。等大家安靜下來，開始了我的講課內(nèi)容。

一個戰(zhàn)士對于手中的武器一定了如指掌，才能發(fā)揮*大效果。一個醫(yī)療戰(zhàn)線的偵察兵一定要的顯微鏡了如指掌，才能發(fā)揮*大效能。而我們對習(xí)以為常的手中武器是不是如此，希望盡量為大家補課，已經(jīng)明白的深入討論其中的奧秘，沒有清楚的咱們一起溫故知新。

資料來源：曹興午.醫(yī)用顯微鏡與顯微攝影.李滌生，陳宏礎(chǔ)，石自明.臨床檢驗學(xué)(高等醫(yī)學(xué)院校檢驗系教材).人民衛(wèi)生出版社.1987,245-280.

一、 顯微鏡的轉(zhuǎn)換盤的精度考量，是以定位精度和齊焦精度為標(biāo)準(zhǔn)

1.定位精度：是指物鏡鏡頭處于工作狀態(tài)時，轉(zhuǎn)化器(轉(zhuǎn)化盤)必須明確與穩(wěn)定，它的視野中心對于其他物鏡，處于同樣工作狀態(tài)時，視野中心的偏移量而言，一定是一致的。換句話說，就是轉(zhuǎn)換哪一個鏡頭，都應(yīng)該在一個相同的位置，不能夠有偏移。

定位精度調(diào)整與觀察：物鏡在轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換以后，用不同的放大倍率的物鏡，觀察物鏡的光軸的不重合?？上扔?0×物鏡調(diào)焦后，以其中心為基準(zhǔn)，再轉(zhuǎn)換到40×物鏡時，中心移位不得超過視場的半徑的2/3，以40×物鏡為基準(zhǔn)，轉(zhuǎn)換到100×物鏡時，中心位移不得超過視場半徑的3/4。顯微鏡的精密度越高，位移越小，**研究顯微鏡甚至是一致，這是考量顯微鏡優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)之一，更是考量使用者的水平標(biāo)準(zhǔn)。為什么?這么說?我們80%的使用者，都是以手擰著鏡頭進行倍率的轉(zhuǎn)換，長期多次、如此操作，導(dǎo)致鏡頭的銜接絲扣損傷和松動，破壞了其精度造成的后果。正確使用是以手持轉(zhuǎn)換盤(上面刻有條紋顯示)轉(zhuǎn)換鏡頭，保持顯微鏡的定位精度。

2.齊焦精度：指的是一個顯微鏡物鏡鏡頭，調(diào)節(jié)在一個工作的位置后，再轉(zhuǎn)換另外一個鏡頭的時候，應(yīng)該在不重新調(diào)節(jié)焦距的情況下，就可以看到物象。例如從低倍轉(zhuǎn)換到高倍鏡頭觀察時，仍然可以看到標(biāo)本的輪廓，其精確度在0.03毫米范圍內(nèi)，允許調(diào)焦就可以觀察清楚，否則為齊焦精度不夠。油鏡的觀察可以與其鏡頭不必齊焦，因為介質(zhì)不同，一個是干系統(tǒng)，一個是油浸系統(tǒng)。但是注意，在油鏡轉(zhuǎn)換時不要使鏡頭碰到蓋片，如果碰到的時候，說明蓋片厚度超過了規(guī)定的厚度，屬于不合格產(chǎn)品，其蓋片厚度要求，在油鏡頭上明確書寫。

3.物鏡的設(shè)計與轉(zhuǎn)換盤的銜接、誤差是以等高轉(zhuǎn)換考量：更是考量使用者操作正確與否的一個指標(biāo)。

等高轉(zhuǎn)換：是指從低倍鏡頭轉(zhuǎn)換到高倍鏡頭的時候，如果物鏡鏡頭是顯微鏡的原配，所有載物片、蓋玻片又完全符合標(biāo)準(zhǔn)要求，在齊焦精度無誤的情況下，一般都可以進行自由的“等高轉(zhuǎn)換”。即利用轉(zhuǎn)換器，直接將高倍鏡頭旋入光軸，只要將微動調(diào)節(jié)稍微調(diào)節(jié)，就可以清晰觀察到物象。如果達不到如此狀態(tài)，就需要檢查蓋玻片、載玻片的厚度是不是超過標(biāo)準(zhǔn)，這兩項都沒有問題，就要考慮顯微鏡的設(shè)計問題，必須與廠家聯(lián)系解決。筆者在中日醫(yī)院在建院驗收130臺日本顯微鏡就發(fā)現(xiàn)類似問題。如果使用者在使用顯微鏡時候，在轉(zhuǎn)換鏡頭時，不是手持轉(zhuǎn)換盤轉(zhuǎn)換，常常是手持物鏡鏡頭，進行觀察倍率的更換，如低倍鏡轉(zhuǎn)換高倍鏡，就扭住鏡頭進行轉(zhuǎn)換，實際是一種常見的操作錯誤，長期如此使用導(dǎo)致鏡頭的絲扣與轉(zhuǎn)換盤吻合精度出現(xiàn)誤差，使得等高轉(zhuǎn)換出現(xiàn)偏移，不僅影響觀察更造成顯微鏡無法使用。筆者曾經(jīng)就這問題對使用者進行調(diào)查，約90%都是如此使用，這樣就減少了顯微鏡的服務(wù)年限。筆者自己購置的一臺顯微鏡，退休后仍然每天使用，經(jīng)30年后，顯微鏡仍然發(fā)揮*大效應(yīng)繼續(xù)工作。

4、微動調(diào)節(jié)聚焦分度計算：我們每天離不開使用顯微鏡，看標(biāo)本使用微調(diào)也習(xí)以為常，從來不考慮分度計算。微調(diào)的總調(diào)節(jié)距離一般為1.8~3毫米，經(jīng)常為2毫米(在微調(diào)手輪上，可以看到的刻度)，由微動手輪控制，旋轉(zhuǎn)手輪，光學(xué)系統(tǒng)能夠非常緩慢的移動。如上升或是下降調(diào)節(jié)的距離為2毫米，如果手輪轉(zhuǎn)動15周，每周50分度，那么每調(diào)節(jié)一個分度，光學(xué)系統(tǒng)的上升或是下降的距離為：2毫米÷(15×50)=0.0027毫米=2.7μm。這樣就可以利用微調(diào)分度測量組織標(biāo)本的厚度。

5、微調(diào)的誤差：微調(diào)在調(diào)焦的范圍內(nèi)，在轉(zhuǎn)動手輪時，物象不應(yīng)該有搖動或是晃動現(xiàn)象，即使存在的時候，*大搖擺角度不>1;用10×物鏡觀察時，在景深的范圍內(nèi)，旋轉(zhuǎn)微調(diào)手輪，物體的平面位置位移在0.05毫米;微調(diào)在上升與下降，手輪轉(zhuǎn)動，應(yīng)允許連續(xù)均勻動作，不應(yīng)該產(chǎn)生滯留、停頓或是跳動發(fā)生。如果是發(fā)生說明顯微鏡出現(xiàn)了故障，在齒輪部位，如果新購入的顯微鏡說明精度誤差大，屬于不合格產(chǎn)品。

6、合軸調(diào)節(jié)即中心調(diào)節(jié)：是考量操作者對顯微鏡知識了解和會不會操作的一個重要指標(biāo);是發(fā)揮顯微鏡*大性能的一個重要因素;也是驗收一臺顯微鏡是否合格的一項標(biāo)準(zhǔn)。

合軸調(diào)節(jié)：使目鏡、物鏡和聚光器的主光軸和可變光闌的中心，必須完全重合在一條直線上，稱為光學(xué)合軸。如果光軸不吻合或不正，會增大物象的象差和彗差，導(dǎo)致觀察物體分辨率降低和清晰度下降。

合軸調(diào)節(jié)主要是調(diào)節(jié)聚光器的位置，因為目鏡與物鏡在出廠時就已經(jīng)調(diào)整好了。有些顯微鏡上的聚光器上，沒有光軸調(diào)節(jié)螺絲(老式顯微鏡)，可以扭動聚光器進行光軸調(diào)節(jié)?，F(xiàn)代顯微鏡在聚光器的支架上，兩旁都有一個光軸校正螺絲，左右手，擰著這兩個螺絲，可以進行合軸調(diào)節(jié)，使聚光器、物鏡、目鏡調(diào)整在一條光軸上，進行合軸調(diào)節(jié)。另外，有的顯微鏡在聚光器的支架上，有三個相隔120度角頂絲，其中一個裝有彈簧的可以伸縮，另外兩個為螺絲，可以旋動，在調(diào)整三個螺絲，使聚光器在水平面移動位置，從而進行光軸調(diào)整，進行合軸。如果合軸不好或是合軸不上，就需要檢查是否光柵的固定螺絲松動，轉(zhuǎn)換器的定位失靈。

調(diào)整方法：將標(biāo)本放在載物臺上，用10×物鏡進行對焦。將聚光器光柵全部打開，調(diào)整分光鏡的角度，使視場的光亮度*亮，將光柵關(guān)閉到*小，上下移動聚光器，將視野收縮聚焦對準(zhǔn)標(biāo)本上。如果視野的收縮象不在正中間，即可調(diào)節(jié)聚光器的光軸校正螺絲使匹配同心為止。將物鏡轉(zhuǎn)換到 40×，調(diào)節(jié)光柵的大小，使視野里的原來收縮象和視野幾乎相等。如若仍然處于偏心時，就需要擰動聚光器的螺絲進行正確合軸。另外，也可以使用拔掉目鏡，從鏡筒上面直接觀察，將光柵關(guān)閉*小時，光柵孔的映像只有一個亮點，正好落在物鏡的中心，即可合格。如果不是，可調(diào)節(jié)下面聚光器調(diào)整，觀察光線偏移進行調(diào)整。

說明：1合軸調(diào)節(jié)使視野影像重合;2與調(diào)節(jié)聚光器光亮大小一致。

7、瞳孔距離調(diào)節(jié)：目前大多數(shù)醫(yī)院的顯微鏡都是雙目顯微鏡，大家在應(yīng)用時一定要先調(diào)節(jié)瞳孔距離。有的學(xué)生問我：“曹老師，我看完了顯微鏡為什么頭痛?心里非常不舒服?”，我告訴他，“是由于你沒有調(diào)整好你的瞳孔距離導(dǎo)致的結(jié)果，我教你如何調(diào)整瞳孔距離!”

在顯微鏡的上都有調(diào)節(jié)裝置，因為每個觀察者的瞳孔距離都是不同的，為此，在使用時必須首先調(diào)整瞳孔距離。圖就像配置眼鏡時，必須給你測定瞳孔距離一樣，我們看顯微鏡一定要先調(diào)節(jié)瞳距。在兩個目鏡的中間的間隔是可以延長平行線進行調(diào)節(jié)，一般在目鏡支撐的鏡架上，刻有53~73的數(shù)字，是調(diào)整瞳距的標(biāo)記數(shù)字。在調(diào)節(jié)過程中，物象的象面位置有所變化，這個變化量有些顯微鏡可以自動補償，大部分需要人工加以補償，即從上面所刻的標(biāo)尺數(shù)值上，讀出你的瞳孔距離的數(shù)值，然后轉(zhuǎn)動右側(cè)目鏡的套筒，使其上面的讀數(shù)與瞳孔距離的數(shù)值一致，然后用右眼對好焦點找好物象，再旋轉(zhuǎn)左側(cè)目鏡套筒，使左右兩眼的物象重合，焦點一致。這樣調(diào)節(jié)后，不僅可以保證物鏡的齊焦精度，也可以使觀察者長時間使用不會漂亮，更可以保護視力。